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실습보고서 - 단백질 정량법
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실습보고서
[단백질 정량법]
◎ 목적
Bradford method를 통해 미지 시료의 단백질 농도를 알아보고 그 원리를 안다.
◎ 이론
● 브래드 퍼드법(Bradford method)
UV-Visible Spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 표준 물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법중 하나이다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. 염료로는 Coomassie Blue G-250을 사용하며, 이 염료가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다.
브래드 퍼드법은 실온에서 사용가능하며, 어느 특별한 장비를 필요로 하지 않는다. 어느 단백질이든 동일한 염료를 더해준 후 약 5분 정도 반응시키고, 595㎚에서 흡광도를 측정하기만 하면 되는 간단한 방법이지만 대신 Coomassie dye가 염, detergent, 지방 등에 의해 쉬이 영향을 받는다는 단점이 있다. 특히나 Sample에 계면 활성제가 조금이라도 존재하는 경우, 정량 값이 크게 영향을 받게 되는데, 이는 염료로 사용하는 Coomassie Blue가 acidic하기 때문이다. 단백질에 따라 Coomassie dye와 결합하는 정도도 조금씩 다를 수 있으므로 주의가 필요하다. 이런 발색을 이용한 단백질의 정량은 시간이 지날수록 결과 값이 달라지는 경우가 생기기 때문에 되도록 빠른 시간 내에 시행해야 한다.
단백질의 정량을 위해서는 표준물질이 필요한데, BSA나 BGG를 이용해 표준곡선을 얻을 수 있다.
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2013.05.08
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