1. 실험제목 : 단백질과 DNA의 정량
2. 실험목적 :
- 단백질을 구성하는 아미노산의 구조와 특성을 이해하고 아미노산의 특성을 이용한 몇 가지 단백질 정량 방법을 이해한다
- 대표적인 단백질 정량방법인 Bradford assay와 Lowry method를 이용하여 단백질을 정량 한다
- DNAdml 구조 및 DNA를 구성하는 네 가지 염기의 구조와 특성을 이해하고 DNA의 정량 방법과 순도결정 방법을 실험한다
3. 실험원리
★ Bradford Assay
원 리
- Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBBG) 가 arg, trp, tyr, his, phr 에 결합시 흡광도의 변화를 측정한다
- dye는 6개의 phenyl groups 과 2개의 sulfonic acid groups을 통해서 단백질과 결합한다. hydrophobic (Tryptophan, Tyrosine, Histidine and phenylalanine) 과 electrostatic (arginine, Lysine) residues를 통해 주로 약하고, noncovalent한 결합을 한다.
- Coomassie Brilliant Blue G-250 dye 는 세가지 형태로 있다
red ( max = 470 nm), blue ( max = 590 nm) and green ( max = 650 nm).
- CBBG 은amino acid와 결합하여 anionic form을 가지고, 595 nm 최대흡광을 (blue)을 가진다. free dye의 경우cationic form 으로 최대 흡광은 465 nm (red)이다.
- 강한 산성 상태에서는 dye는 doubly-protonated red form으로 가장 안정한 형이고, 단백질에 결합시에 dye는 unprotonated, blue form이 가장 안정한 형이다.
free dye(cationic) bound dye(anionic)
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2013.07.19
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