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생화학실험 - Siderophore type detection 및 발색반응을 통한 siderophore의 작용기 확인
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●Title
- Siderophore type detection 및 발색반응을 통한 siderophore의 작용기 확인
●Purpose
- Siderophore type이 무엇인지 확인하고, column 후 그 타입이 발색한 시료를 모아 Silicagel TLC를 통해 나타난 스팟의 발색반응을 통한 siderophore의 작용기를 확인한다.
●Principle
- sephadex LH-20
● steroid, 생물학적 활성을 분리하기 위해 사용
● 낮거나 빈값을 제공함으로써 steroid 분석에 유용
● 25° C이하에서 분리되며 세척 후 재사용 가능
- FeCl₃
● 염화제일철 용액에 염소 가스를 통하여 얻은 용액을 농축, 방냉하여 제조
● 물에 잘 녹고 수용액은 강산성, 단백질을 응고하는 힘을 가짐
- column chromatography
● 유리관과 같은 원기둥 모양의 관에 산화알루미늄이나 이온교환수지 등을 충전한 것
● column에 시료용액을 통과시키면 시료용액 중에 함유된 여러 물질이 분리되어 층상으로 column 속에 위치
● 각 물질은 적당한 용리액을 흘림으로써 각 성분을 추출
- TLC(Thin layer chromatography, 박층 크로마토그래피)
● 정지상으로 흡착제인 실리카겔이나 알루미나를 유리판 위에 얇게 입힌 정지상판과 이 판 위를 흐르는 용매를 이동상으로 하였을 때 TLC기판에 spotting된 물질은 이동상인 용매와 고정상인 흡착물질에 의해 경쟁이 일어나서 물질이 분리
● 종이크로마토그래피에 비해 전개 시간이 짧고 분리능률이 양호하며, 강한 산, 시약 등을 발색시약으로 사용
● TLC는 column chromatography를 위한 최적의 elution solvent를 찾는데 유용하게 사용되며 아주 적은 양으로도 시료를 분석한다.
- Rf(Retention factor)
● 각 물질마다 특정한 용매조성에서 시료가 움직인 거리와 용매가 움직인 위치까지의 거리의 비
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2014.06.19
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