생물학 실험 보고서
소속
학번
이름
실험날짜
현미경번호
실험제목
전기영동
실험목적
전기영동의 원리를 이해하고 아가로오스 전기영동의 수행과정을 이해하고 아가로오스 젤 전기영동시 DNA 이동에 영향을 미치는 요인을 이해한다.
준비물
Plasmid DNA 시료, 마이크로 파이펫, 파이펫 tip, 시약접시, 시약스푼, 저울, 메스실린더, 삼각플라스크, 아가로오스, 1X TAE buffer, 랩, 전자레인지, Etbr, DNA size marker, loading dye, 수평식 전기영동장치, 자외선 조사장치
실험방법
1) Gel casting stand, tray, comb를 준비한다.
2) Gel casting stand에 tray를 넣고 comb를 끼운다.
3) 삼각플라스크를 준비한다.
4) Agarose powder 0.3g을 재서 플라스크에 넣는다.
5) 1X TAE buffer 35 ml을 재서 플라스크에 넣는다.
6) 전자레인지에 넣고 50초간 가열한다. (30초에 꺼내서 흔들어주고, 다시 10초 뒤에 흔들어주고, 10초 후 꺼낸다.)
7) Agarose가 다 녹았으면 온도계를 이용해 60도가 될 때까지 상온에서 식힌 후 Etbr을 2 l씩 넣어준다.
8) EtBr을 잘 섞어 준 후 tray에 gel을 조심스레 부어준다.
9) Gel이 굳을때까지 10 min간 기다린다.
10) 다 굳은 gel에서 comb를 빼고 tray채로 꺼낸 후 반투명 테이프를 제거한다.
11) Electrophoresis tank에 선까지 1X TAE를 채우고 gel을 넣는다.
12) Parafilm을 깔고 DDW 16l에 10X loading buffer 2 l와 plasmid DNA 2l 섞는다.
13) 첫 번째 well을 띄우고 2번째부터 차례로 loading 한다.
14) 첫 번째 well 에 1Kb ladder 2 l를 넣어준다.
15) 뚜껑을 덮고 전원을 켜 25분간 전기영동을 한다.
16) UV에서 band를 확인한다.
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2013.12.10
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