일반생물학 실험 - 미생물의 배양 및 관찰과 Gram 염색

실험제목
1.미생물의 배양 및 관찰
2. Gram 염색
실험날짜

실험목적
미생물 배양법, 무균조작, 멸균법에 대해 공부한다.
현미경 관찰 및 염색법을 통해 미생물을 관찰한다.
Gram 염색법의 목적과 세균 감별의 중요성에 대해 배우고
박테리아의 종류를 Gram염색법으로 분류, 직접 염색해본다.
실험 준비물
세균배양과 배지(Agar plate) 제조 (한 조당 배지 500mL 기준)
▶도구 및 기타
Autoclave – 가압 멸균
전자 저울, 자석 교반기(배지의 재료들을 섞는 도구), petri-dish,
도말봉, 분수대 물 (미생물을 추출할.. 물)

▶배지 구성재료
Tryptone 10g – 세균에 아미노산을 공급하는 역할
호묘 추출물(yeast extract) 5g
NaCl 5g
증류수 (Distilled water) 1L – 여기까지가 액체배지
Agar 15g – 액체배지(luria bertani를 굳히는 역할)
*조성이 중요(증류수 1L 기준으로 만든 배지)
Gram 염색
▶도구 및 기타
스포이드 (spoide), 튜브 (tube), slide glass, cover glass
알코올 램프, 광학 현미경, 비커 (beaker), 증류수,
배양한 박테리아

▶Gram 시약
Crystal Violet(CV) – peptidoglycan을 염색하는 시약
Logal’s solution(Gram’s iodine)- CV와 복합체를 이뤄 염색도움
Safranin - 대조염색을 위한 시약
Acohol 또는 Acetone – 탈색할 때 사용

 

실험 방법
[세균배양과 배지 제조]
① 배지(agar plate) 의 제조
1) Tryptone 10g, yeast extract 5g, Nacl 5g,
Agar 15g을 증류수 1L에 넣어 녹인다.
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