[공학생물학] 브래드포드 단백질 정량법[The Bradford Method for Protein Quantitation]

공학 생물학 및 실험 레포트

1. 제목
The Bradford Method for Protein Quantitation

2. 준비물
⓵ Bradford 시약
⓶ Protein Standard Solution
⓷ Spectrophotometer와 Quartz cuvette, Pipet
⓸ Milk, 증류수
⓹ ep tube
⓺ BSA Protein(standard)

3. 실험 과정
⓵ Milk를 증류수를 이용하여 , , 원액의 비율로 dilution한다.
⓶ Bradford 시약을 1㎖씩 ep tube에 7개 넣는다.
⓷ Standard Soulution을 0㎕, 2㎕, 4㎕, 6㎕씩 tube에 넣는다.
⓸ diluted milk를 5㎕씩 ep tube에 넣는다.
⓹ 거품이 나지 않도록 천천히 뒤집으며 섞는다.
⓺ 각각 시료를 1.5㎖ cuvettes에 1㎖씩 넣는다.
⓻ 7.595㎚ 파장에서 Standard Solution의 흡광도를 측정한 후 기록한다.
⓼ 나머지 시료의 흡광도를 측정한 후 기록한다.

4. 서론
Bradford Method는 산성 용액에서 불그스름한 갈색을 띄는 Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBBG) 염료의 흡광도 변화를 측정한다. CBBG가 free dye형태로 있을 때의 최대 흡광은 465㎚(빨강)이지만, 단백질의 아미노산과 결합하여 anionic form일 때의 최대 흡광도은 595㎚(파랑)인 점을 이용한다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. CBBG의 음이온이 단백질의 양이온 부분과 정전기적 인력에 의한 결합을 한다. 각각의 Protein 분자에 결합된 CBBG dye의 수는 대략 Protein 에 있는 양이온 수와 비례한다. 단백질에 결합한 CBBG는 용액을 갈색에서 푸른색으로 변하게 한다.
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