미생물학 실험 - Mini-Prep[Hybrid-Q Plasmid Rapid prep Kit]실험

․제 목: Mini-Prep (Hybrid-Q Plasmid Rapid prep Kit)

1.실험목적

Mini Prep이란 DNA-isolation에 있는 원리 중 하나로 Plasmid DNA분리에 사용되는 방법이며 많은 후보를 빠른 시간 내에 분석하는 방법이다. Prep은 Prepartion의 약자.DNA를 소량으로 추출한다는 의미. 주로 이용되는 Alkylation lysis(denaturation)법과 boiling method, Iithium method법이 있다.

2.실험원리

DNA와 plasmid의 고유 형태구조 원리에 의한 분리 방법으로써 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix의 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 PH변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않아 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다.

3.실험방법

1. 3ml bacterial culture (DH5a T-vector OmPGRP)를 12000rpm에서 1분간 centrifuge (2ml e-tube에 1.6ml씩 여러 번 나누어 cell down 시킨다.)

※OmPGRP는 염기쌍이 600개인 유전자. 대장균에 넣고 빼내는 실험 centrifuge: 원심분리. 각 tube에 자신의 이름을 써놓는다.

2. 상층액을 버리고, 250㎕의 S1 buffer (Resuspension buffer)를 넣어 pellet을 resuspend.
(덩어리가 남지 않도록 vortexing이나 pipetting으로 충분히 resuspend.)

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