[식물생리학]제한효소 DNA 절단과 전기영동법과 PCR에 의한 DNA분리 및 확인

1.실험 목적

- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기 영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.

2. 실험 원리

1) 제한 효소 (Restriction enzyme)

(1) 제한 효소의 정의
* 제한 효소는 DNA 분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의 DNA용
가위이다.

- DNA도 특정 부위를 절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이
연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 이런 역할을 하는
효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각
exonulease, endonuclease라고 부른다. (대부분의 제한효소는 4쌍 또는 6쌍의
염기배열을 인식하여 자르는데, 제한효소에 의해 잘라지게 되면 양 끝이 상보적인
가닥이 되거나 밋밋한 부분으로 된다. 만일 같은 제한효소로 잘린 DNA가닥을
만나면 상보적인 끝부분 때문에 재결합하기가 쉬운데, 이들을 연결해주는 역할을
하는 것이 리가아제이다.) Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소이며,
DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에
존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해
들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는
것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기( adenine, cytosine)를 Methylation 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다. 제한효소는 여러
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