DNA 증폭실험

DNA 증폭실험

1. 실험 목적
생명공학의 기초가 되는 분자 생물학의 기본 기술인 DNA를 다루는 기술을 알아본다.
미생물에서 Plasmid DNA를 분리하고, PCR을 이용하여 DNA를 증폭하고, 제한효소를 이용하여 DNA를 절단한 후 Mini Gel Unit를 이용하여 전기영동법에 의해 DNA를 분리하고 확인한다. Plasmid DNA를 이용하여 미생물 형질전환을 한 후 미생물 형질전화체 선별하는 기술까지 분자생물학을 공부하는데 필수적인 실험 기술을 습득한다.

2. 실험도구
1) Gradient PCR
용도 : 정확한 온도조절을 할 수 있는 기기로써 Taq polymerase를 이용하여 소량의 특정한 DNA를 대량 증폭하는데 이용한다. 또한 cell로부터 분리된 mRNA를 이용하여 cDNA의 합성에도 이용가능하다.
특징 : 특정 DNA의 대량 증폭을 위해 25~30 cycle을 반복해야 하는데 이때 정확한 온도와 시간 조절이 필요하다. 기기 내부에 작은 홈이 있어 홈 안에 PCR mixture가 들어 있는 작은 tube를 장착하게 되는데 각 홈 안의 온도 변화 또한 민감하다고 할 수 있다. PCRmachine은 온도 변화에 있어 미묘한 차이와 시간을 적절히 조절하는 기기라 할 수 있다.
2)Mini Gel Electrophoresis Units(Mupid 21)
용도 : 단백질이나 핵산 등의 고분자 물질은 하전을 띄므로 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장을 띤 매질(gel)에서 이동 분리 시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 Mini Gel 전기영동 장치
특징 : Agarose, polyacrylamide, SDS polyacrylamide gel 모두 사용 가능
가볍고 단단하고 안전하고 사용하기가 쉽다.
power supply 내장
Nucleic acid와 Protein 분리를 위해 사용 가능

3. 실험시 주의 사항
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[hwp/pdf]DNA 증폭실험