단백질분리정제

▣ 단백질의 분쇄 및 원심분리
(1) Homogenizer
: 시료의 충분한 혼합, 교반, 분쇄에 사용되는데 시료속에서 dispersing shaft가 회 전할 때 dispersing shaft의 끝부분의 rotor구멍으로 시료가 강하게 빨려 들어가 stator사이에서 혼합되어 높은 압력으로 수평 또는 수직으로 분산되어 혼합된다. 시료의 입자크기, 점도에 따라 rotor와 stator를 선택하여 사용하며 회전속도는 5,000～45,000rpm 이므로 적절한 회전속도를 이용한다.
(2) Centrifuge
․원리 : 물질에 고도의 원심력을 걸어줄 경우 각 물질의 질량 또는 밀도에 따라 원심력 내에서 이동 속도가 다름을 이용하여 물질을 분리한다.
․종류 : 회전속도에 따라 다음과 같이 나뉜다.
Low speed centrifuge (최대회전속도 10,000rpm 미만)
High speed centrifuge (최대회전속도 10,000～30,000rpm)
Ultracentrifuge (최대회전속도 30,000～120,000rpm)
Method
1. 단백질 분리에 사용할 시료의 선정 및 준비
- B-3조 : 메주콩(100g)
2. 0.1M Tris-HCl(pH7.2) 제조
3. Homogenization
4. 원심분리(9,000rpm/20min)
5. 상등액 회수
: 260ml의 상등액을 얻을 수 있었다.
6. 냉동보관
▣ Salting Out
(1) 염석 (Salting Out)
염석은 물에 잘 용해하는 염(황산암모늄 등)을 단백질 혼합액에 가하여 이온 강 도를 증가시켜 단백질을 침전시키는 것이다.
Method
1. Ammonium Sulfate를 분말화 한다.
2. Ammonium Sulfate첨가
: 포화 도표로부터 얻은 118g Ammonium Sulfate를
전 실험의 상등액에 조금씩 첨가시킨다.
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